抗結核藥物服用方法是否正確，直接影響藥物的療效，即便是同一劑型的藥物，由于服藥方式和服藥時間不同，所獲得血藥濃度和達峰時間各異。口服抗結核藥物一般采用一日一次，空腹頓服的方式最佳。

利福平的正確服用方法是在餐前2小時空腹頓服。對照研究顯示，進食者血藥濃度峰值比空腹頓服者減少36%，達峰時間延遲。空腹口服利福平吸收迅速，1~2小時即可達高峰血濃度，有效血濃度維持8~12小時。而用牛奶、麥乳精沖服利福平者，服藥后1~2小時血藥濃度近乎于零，延長至6小時才出現較低的高峰血濃度，而維持時間并不延長。這將大大影響利福平的治療效果。

除利福平外，異煙肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺均為水溶性制劑，主要在小腸內以擴散方式透過黏膜被機體吸收。異煙肼宜空腹服用，并應避免與制酸藥物同時服用。吡嗪酰胺亦以空腹頓服為佳，不但有利于發揮抗菌作用，而且與其他抗結核藥物聯用有利于發揮協同作用，但鑒于該藥可引起不同程度的胃腸反應，不能適應者可考慮分次服用。

采用頓服的方式用藥，是指一日量在同一時間一次服用。分次服藥是錯誤的，這會使藥物很難發揮協同作用，至少抗菌作用不充分。異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇四種藥聯合頓服，有利于殺滅快速生長、繁殖的菌群，對結核病的痊愈有重要意義。

對難以耐受利福平等藥物造成胃腸道刺激的患者，可改為晚間睡前頓服。這與晨起空腹頓服的平均血藥濃度無差別，均在最低抑菌濃度水平以上。